氯膦酸鹽脂質(zhì)體巨噬細(xì)胞促進(jìn)斑馬魚(yú)心肌凍傷修復(fù)模型中巨噬細(xì)胞清除解決方案

在人類(lèi)心臟急性心肌梗死后，數(shù)百萬(wàn)個(gè)心肌細(xì)胞丟失并被纖維化疤痕所取代。雖然這種纖維化疤痕對(duì)于維持心臟的結(jié)構(gòu)完整性是必要的，但它的存在與收縮質(zhì)量的減少相結(jié)合，最終會(huì)導(dǎo)致心力衰竭。仍然迫切需要開(kāi)發(fā)治療策略來(lái)替代丟失的心臟組織。非哺乳動(dòng)物脊椎動(dòng)物生物，如硬骨斑馬魚(yú)，具有在多種類(lèi)型損傷后再生丟失的心肌細(xì)胞的能力。值得注意的是，斑馬魚(yú)可以在冷凍損傷后再生心臟，冷凍損傷是一種損傷模型，其中放置在心臟上的液氮冷卻探針會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡、炎癥反應(yīng)的激活和含有纖維化膠原蛋白的疤痕沉積，類(lèi)似于人類(lèi)心臟中的心肌梗塞。雖然過(guò)去二十年的研究工作使我們對(duì)心臟再生機(jī)制的了解大大增加，但目前尚不清楚傷口邊界的再生心肌細(xì)胞如何侵入并最終取代受傷后含有膠原蛋白的疤痕組織。

通過(guò)對(duì)斑馬魚(yú)心臟再生過(guò)程中心肌細(xì)胞突出到受傷組織中的深入分析。我們表明，傷口邊界的心肌細(xì)胞表現(xiàn)出遷移細(xì)胞的特征，包括運(yùn)動(dòng)絲狀偽足樣延伸到受傷組織中，以及調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)、粘著斑和 ECM 重塑的基因表達(dá)程序的上調(diào)。此外，我們表明巨噬細(xì)胞在邊界區(qū)起著重塑 ECM 和促進(jìn)心肌細(xì)胞突出的重要作用。然后我們表明 Mmp14b 是巨噬細(xì)胞存在和邊界區(qū) ECM 重塑的重要調(diào)節(jié)因子，隨后心肌細(xì)胞在斑馬魚(yú)心臟再生過(guò)程中侵入受傷組織。

論文信息：

論文題目：Border-zone cardiomyocytes and macrophages regulate extracellular matrix remodeling to promote cardiomyocyte protrusion during cardiac regeneration

期刊名稱(chēng)：Nature Communications

時(shí)間期卷：16, Article number: 3823 (2025)

在線時(shí)間：2025年4月23日

DOI：doi.org/10.1038/s41467-025-59169-4

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)：CP-005-005

規(guī)格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱(chēng)：Clodronate Liposomes and Control Liposomes

辦事處：Target Technology（靶點(diǎn)科技）

氯膦酸鹽脂質(zhì)體斑馬魚(yú)巨噬細(xì)胞。斑馬魚(yú)心臟冷凍損傷后，多種細(xì)胞類(lèi)型協(xié)調(diào)對(duì)損傷的反應(yīng)。例如，內(nèi)皮細(xì)胞、心內(nèi)膜細(xì)胞和心外膜細(xì)胞已被證明可提供生長(zhǎng)因子和信號(hào)分子，以促進(jìn)受傷組織的血運(yùn)重建和心肌細(xì)胞再生。成纖維細(xì)胞主要起源于心外膜，已被證明在心臟再生過(guò)程中沉積 ECM 以支持心臟，并且對(duì)損傷后心肌細(xì)胞增殖至關(guān)重要。近年來(lái)，免疫細(xì)胞在促進(jìn)心臟再生過(guò)程中的重要性也得到了認(rèn)可。特別是，巨噬細(xì)胞已被證明在斑馬魚(yú)、蠑螈和新生小鼠心臟的損傷再生中起著重要作用。巨噬細(xì)胞已被證明直接促進(jìn)和調(diào)節(jié)冷凍損傷心臟中瘢痕/ECM 的組成。此外，氯膦酸鹽脂質(zhì)體給藥（荷蘭Liposoma，清除巨噬細(xì)胞）或使用遺傳模型消耗巨噬細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致 CM 增殖和再生心臟新生血管形成缺陷。雖然很明顯，許多（如果不是全部）心肌細(xì)胞類(lèi)型在心臟再生過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用，但它們對(duì)冷凍損傷后心肌細(xì)胞纖維化組織重新填充的貢獻(xiàn)在很大程度上是未知的。氯膦酸鹽二鈉脂質(zhì)體清除巨噬細(xì)胞在斑馬魚(yú)心臟凍傷模型巨噬細(xì)胞功能研究，荷蘭Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes見(jiàn)刊于Nature Communications：斑馬魚(yú)交界區(qū)心肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)重塑，促進(jìn)心臟再生過(guò)程中心肌細(xì)胞突出。

氯膦酸鹽脂質(zhì)體巨噬細(xì)胞促進(jìn)斑馬魚(yú)心肌凍傷修復(fù)模型中巨噬細(xì)胞清除解決方案：

注射方式：腹腔注射

注射劑量：10ul

注射時(shí)間點(diǎn)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模Ｇ盎蛘呓：?/strong>

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

巨噬細(xì)胞清除方案
Tg（mpeg：NTR-YFP） 成年魚(yú)的腦室受到冷凍損傷。然后將冷凍損傷的魚(yú)在冷凍損傷后 4 至 6 天（每天補(bǔ)充）在 5 μm 尼呋匹林醇或 DMSO 對(duì)照水浴中孵育。以 7 dpci 提取心臟，并用 GFP 抗體進(jìn)行免疫染色，以檢查巨噬細(xì)胞清除效率和鬼筆環(huán)肽染色，以量化如上所述邊界區(qū)的 CM 突起。

為了清除駐留的巨噬細(xì)胞，在冷凍損傷前 8 天用 10 μl 氯膦酸鹽脂質(zhì)體 （5 mg/ml） （Liposoma， Amsterdam， The Netherlands） 或 PBS 對(duì) Tg （mpeg1：EGFP） 成年魚(yú)進(jìn)行 IP 注射。如上所述，以 7 或 10 dpci 提取心臟，然后進(jìn)行冷凍切片、CHP 染色和鬼筆環(huán)肽染色。如上所述，對(duì)邊界區(qū)的 CHP 強(qiáng)度和 CM 突起進(jìn)行定量。

為了在以后的時(shí)間點(diǎn)清除巨噬細(xì)胞，在 10 dpci 收集心臟之前，以 3、6 和 9 dpci ip（mpeg1：EGFP）注射 10 μl 氯膦酸鹽脂質(zhì)體 （5 mg/ml）（Liposoma，阿姆斯特丹，荷蘭）或 PBS 對(duì)照脂質(zhì)體。研究巨噬細(xì)胞清除對(duì) CMs 中 mmp14b 過(guò)表達(dá)的影響，Tg（hsp70l：loxP-EGFP-loxP-mmp14b-P2A-tagBFP）;在冷凍損傷前 1 天和之后每 4 天向成年魚(yú)注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體或 PBS 脂質(zhì)體 Tg（?5.1myl7：CreERT2）。如上所述，進(jìn)行他莫昔芬/乙醇注射和熱休克以誘導(dǎo) mmp14b 過(guò)表達(dá)。以 10 或 21 dpci 提取心臟，然后按上述方式進(jìn)行冷凍切片和鬼筆環(huán)肽或 MHC 染色。如上所述，對(duì)邊界區(qū)的 CM 突出和 CM 皮質(zhì)覆蓋進(jìn)行量化。